Proprietes fonctionnelles du recepteur a l'inositol 1,4,5 trisphosphate

Le recepteur a l'inositol 1,4,5-trisphosphate (IP3R) est un canal calcique jouant un role preponderant dans le controle du calcium a l'interieur des cellules non-excitables. Il existe trois sous-types d'IP3R qui sont encodes par des genes differents. L'objectif de mon travail etait d'evaluer la regulation des IP3Rs par differents mecanismes extrinseque et intrinseque.;Les differents domaines des IP3Rs ont des roles particuliers dans le controle fin de l'homeostasie calcique intracellulaire. Nous avons montre qu'un mutant tronque de l'IP3R-2 (CTR2), qui ne comporte que les 2 derniers domaines transmembranaires et la queue C-terminale, se comporte comme un canal calcique constitutivement actif. Les cellules exprimant le CTR2 ont moins de Ca1+ dans leurs reserves intracellulaire, relachent moins de Ca1+ en reponse aux agonistes et montrent une entree capacitative de Ca1+ en conditions basales. Ces resultats suggerent qu'en absence d'une regulation intrinseque par sa portion N-terminale, l'IP3R-2 se comporte comme un canal calcique ouvert.;L'ensemble de mon travail met en evidence un mecanisme extrinseque (PKA) et un mecanisme intrinseque (N-terminal) de regulation de l'activite des IP3Rs.;Mots cles: Relache de Cat+, PKA, inositol 1,4,5-trisphosphate (IP3) inositol 1,4,5-trisphosphate recepteur (IP3R), regulation, phosphorylation, activite canal.;Avec une approche in vitro, nous avons montre que l'IP3R-3 est un substrat de la proteine kinase dependante de l'AMPc (PKA). Avec une approche de "backphosphorylation", nous avons egalement montre que la PKA phosphoryle de maniere endogene l'IP3R-3 dans les cellules R1Nm5F intactes. Avec des etudes de liaison, nous avons montre que la PKA augmente l'affinite de l'IP3R-3. La mesure des relaches de Ca1+ induites par l'IP3 sur des cellules permeabilisees a aussi revele que la PKA augmente l'affinite apparente de l'IP3R-3. Enfin, dans des cellules R1Nm5F intactes, la PKA a potentie la relache de Ca 1+ induite par le carbachol et le facteur de croissance epidermique, deux agonistes qui activent la phospholipases C par des mecanismes differents. Ces resultats ont revele une etape de convergence ou la voie de signalisation de l'AMPc et la voie de signalisation du Ca1+ interagissent pour moduler differentes fonctions au sein d'une seule et meme cellule face a des stimuli externes.