Conservation a long terme des embryons somatiques matures du genre Picea sp (French and English text)

Dans cette thèse, nous avons mis l'accent sur le développement d'une méthode de conservation à long terme pour les embryons somatiques matures d'épinette et sur la caractérisation des phénomènes physiologiques qui prennent place pour assurer la survie des embryons durant leur traitement de conservation.; Après avoir développé un protocole de déshydratation reproductible, nous avons évalué les effets de différents niveaux de déshydratation sur la germination et la régénération en plantules des embryons somatiques d'épinette noire. En déshydratant lentement les embryons sous une humidité relative de 97% jusqu'à une teneur en eau de 16% (base de masse fraîche) équivalente à 0,19 g H₂O g−1 masse sèche (g/g), nous avons amélioré la synchronisation de l'émergence racinaire des embryons sans affecter leurs taux de germination et de conversion en plantules. Ensuite, nous avons étudié les effets du taux de séchage, de la teneur en eau dans les embryons avant la cryoconservation ainsi que du taux de décongélation et de réhydratation sur la survie des embryons cryoconservés. Les embryons somatiques, pré-déshydratés à une teneur en eau de 0,23 g/g, tolèrent une immersion directe dans l'azote liquide sans cryoprotectant. Ils peuvent par la suite être utilisés, soit directement pour la production de plants, soit comme explants pour produire du nouveau tissu embryogène et commencer une nouvelle production d'embryons. Notre protocole de cryoconservation a été appliqué avec succès à des embryons produits à partir de plusieurs génotypes d'épinette noire et d'épinette blanche.; Comme la phase de déshydratation joue un rôle clé dans notre protocole de cryoconservation, nous avons cherché à identifier les composantes du mécanisme de protection enclenché pendant la déshydratation lente. Nous avons donc examiné l'effet d'une perte en eau partielle sur les contenus en protéines solubles, en sucres et en amidon des embryons somatiques. La survie des embryons peut être en partie expliquée par une synthèse accrue de sucres solubles (saccharose et raffinose) et de déshydrines pendant la phase de déshydratation. L'augmentation du contenu en saccharose et en raffinose pourrait être le résultat de la dégradation de l'amidon. Ces sucres non-réducteurs pourraient agir, seuls ou en combinaison avec les déshydrines, comme agents protecteurs des structures cellulaires en participant à la formation de verre biologique.