Regulation transcriptionnelle de l'expression du gene de la keratine 19 (French text)

La production de protéines spécifiques d'un tissu confère à ces derniers une fonction particulière qui assure à l'organisme entier son développement et son maintien vital. La production de ces protéines doit être contrôlée avec précision sans pour autant demeurer constante tout au long de l'ontogenèse. Cette étude porte précisément sur les mécanismes de contrôle transcriptionnel responsables de l'expression de l'une de ces protéines, la kératine 19 (K19). Les kératines sont des protéines de la famille des filaments intermédiaires qui se retrouvent spécifiquement dans les cellules épithéliales. Les gènes encodant ces protéines constituent un modèle intéressant pour étudier les mécanismes de contrôle de l'expression génique lors de la différenciation cellulaire car l'expression de ceux-ci peut varier selon le type et l'environnement cellulaire, l'état de différenciation de la cellule, le stade de développement ainsi que la transformation néoplasique.; Par l'utilisation de la DNase I in vivo, deux sites hypersensibles en amont du gène (5'HS1 et 5'HS2) et un dans le premier intron (IHS1) ont été identifiés. La présence du site 5'HS1 revêt un attrait particulier pour notre étude. D'une part, parce que de façon générale, les sites hypersensibles à la DNase I coïncident avec des régions de régulation capables de lier des facteurs de transcription et, d'autre part, parce que ce site pourrait être spécifique au lignage épithélial. En effet, ce site est observé uniquement dans la lignée épithéliale de cellules KLN 205 qui exprime fortement la K19. Parallèlement à cette analyse, deux éléments de régulation ont été cartographiés dans une région contenue à l'intérieur du site 5'HS1.; La caractérisation fonctionnelle de cette région par transfections transitoires a permis d'identifier un élément activateur et un élément répresseur de l'activité transcriptionnelle. Ces deux éléments sont capables de lier in vitro et in vivo des facteurs de transcription qui pourraient moduler la transcription du gène K19 au cours de la différenciation épithéliale. Plusieurs essais de changement de mobilité électrophorétique, dont ceux utilisant des anticorps spécifiques, ont permis d'identifier des complexes comprenant les facteurs ATF/CREB et Sp1. Certains facteurs de la famille ATF/CREB sont associés à la voie de transduction des signaux cellulaires impliquant l'AMP cyclique comme second messager et pourraient jouer un rôle important dans la différenciation cellulaire. Quant au facteur Sp1, il a été identifié au complexe de l'élément répresseur et permet, lorsque transfecté, de diminuer l'effet de répression. De plus, l'utilisation des techniques d'empreinte à la DNase I et de buvardage Southwestern ont permis d'identifier des protéines différentes de celles mentionnées ci-dessus pouvant se lier in vitro aux séquences de la région répressive. Ce dernier résultat suggère la présence de nouveaux facteurs auquels une fonction répressive pourrait être associée. (Abstract shortened by UMI.)...