Human ADT/DHEA sulfotransferase: A combined study of enzymology and crystallography

Le dehydroepiandrosterone sulfate (DHEA-S) est produit dans les surrenales par l'action de la DHEA-sulfotransferase (DHEA-ST) et joue un role cle comme precurseur des steroides sexuels dans les tissus peripheriques. La DHEA-ST humaine a ete purifiee a partir des cellules de E. coli et caracterisee par cinetique enzymatique. Sa structure tridimensionnelle a ete determinee a 2.7 A en complexe avec l'androsterone (ADT). Nos donnees cinetiques et structurales demontrent que l'ADT est reconnue comme un substrat, ce qui implique que la DHEA-ST agit comme une ADT sulfotransferase dans le foie.; Nous avons utilise la mutagenese dirigee pour elucider le role des acides amines impliques dans la reaction du transfert du sulfonate par la DHEA-ST. Nos etudes indiquent que la dimerisation est necessaire pour la reconnaissance du cofacteur et que les residus His-99, Lys-44 et Ser 129 ont un role catalytique. Le Trp-77 a un double role comme une base structurale avec une fonction catalytique. Un mecanisme de reaction pour l'hydrolyse du PAPS incluant un role catalytique pour le Trp-77 est propose.