Preliminary Study Of Five Phytoestrogens On A375 Cell Melanin Synthesis And Regulatory Role In Related Cell Signal Pathway

Objective:By studying the biological characteristic effects of five traditional Chinese medicine phytoestrogens which include Psoralen,Bakuchiol,Betulin,Baicalein and Genistein on human melanoma and the key enzyme in the process of melanin secretion regulation and intervention of MAPK signal pathway,to analyze the inhibition effects of phytoestrogens on melanin formation in the process of chloasma formation,to clarify the potential mechanisms of five phytoestrogens for the treatment of chloasma,and to provide theoretical basis for rational use of traditional Chinese medicine phytoestrogens in preventing and treating chloasma and skin pigmentation disease.Methods:The A375 cell lines were treated with five phytoestrogens respectively.MTT test,NaOH schizolysis method and L-dopa oxidation method were respectively used to detect the cell proliferation,the content of melanin and the activity of tyrosinase(TYR)to analyze the intervention effects of five phytoestrogens on melanin formation.RT-PCR was applied to measure the mRN A expression levels of tyrosinase(T YR),and tyrosinase related proteins,and the mRN A expression levels of ERKI、ERK2 and JNK2 which were the key protein kinases of MAPK signal pathway,to discuss the molecular mechanisms of five phytoestrogens inhibiting melanin secretion.Results:Psoralen(100μmol·L-1、10μmol·L-1),Bakuchiol(100μmol·L-1、10μmol·L-1、1μmol·L-1),Betulin(100 μmol·L-1、100μmol·L-1),Baicalein(100μmol·L-1、100μmol·L-1、1μmol·L-1),Genistein(100μmol·L-1、10μmol·L-1、1 μmol·L-1)can significantly inhibit the A375 cell proliferation(P<0.05),which showed significant cytotoxity on human melanoma and didn’t fit for the next research.Psoralen(1μmol·L-1、10-1μmol·L-1、10-2 μmol·L-1、10-3μmol·L-1),Bakuchiol(1 0-1μmol·L-1、10-2 μmol·L-1、1 0-3μmol·L-1),Betulin(1μmol·L-1、10-1μmol·L-1、10-2μmol·L-1、10-3μmol·L-1),Baicalein(10-1 μmol·L-1、10-2μmol·L-1、10-3μmol·L-1),Genistein(10-1μmol·L-1、10-2μmol·L-1 10-3μmol·L-1)can inhibit melanin synthesis(P<0.05)and TYR activities(P<0.05)in different degrees.Psoralen(1μmol·L-1),Betulin(1μmol·L-1),Bakuchiol(10-1μmol·L-1),Baicalein(10-1μmol·L-1),Genistein(10-1 μmol·L-1)can variously restrain the mRNA expressions of TYR,TRP-1 and TRP-2(P<0.05).Psoralen(μmol·L-1),Betulin(1μ mol·L-1),Bakuehiol(1 0-1μmol·L-1),Ba icalein(10-1μmol·L-1),Genistein(10-1μmol·L-1)can in varying degrees control the mRNA expressions of ERK 1、ERK2 and JNK2(P<0.05).Conclusion:The results show that five phytoestrogens can significantly inhibit the activity of TYR and the key enzyme of MAPK signal pathway and to have the effect of inhibiting melanin synthesis in A375 cell lines.The possible molecular mechanism of five phytoestrogens inhibiting melanin synthesis may be by cutting TYR,TRP-1 and TRP-2 mRNA expression quantity and/or inhibiting MAPK signal pathway.