Nanoparticules recouvertes de carbohydrates comme biocapteurs de lectines

Les interactions proteines-carbohydrates sont impliquees dans l'adhesion des bacteries a la surface cellulaire. L'utilisation des carbohydrates a permis le developpement de nouvelles strategies therapeutiques et de biodetection. Comme leurs interactions avec les proteines sont faibles, une amplification de celles-ci est necessaire.;Pour synthetiser les GNP, des dendrimeres de type poly(amidoamine) PAMAM sont adsorbes sur des nanoparticules d'or (NP). Puis, les amines terminales de NP sont modifiees avec des carbohydrates (et des fluorophores) par un couplage thio-uree. Les methodes physico-chimiques de caracterisation ont demontre que des GNP solubles dans l'eau, ayant une taille d'environ 2 nm, avec peu de defauts sur les branches de PAMAM et un bon rapport stoechiometrique N : S sont obtenues. Un titrage des amines terminales avec le TNBS permet de constater les bons rendements du greffage des carbohydrates.;Les GNP ont ete utilisees comme biocapteurs pour la detection de lectines vegetales et d'une bacterie, E. coli par fluorescence et microscopie. Les mesures de fluorescence ont demontre que la surface d'or des GNP est impliquee dans le processus d'attenuation de la fluorescence des lectines par un mecanisme de transfert d'energie de type SET.;Cette methode a permis de determiner les parametres thermodynamiques et cinetiques de l'interaction lectines-carbohydrates. Les constantes d'affinites de la lectine Con A pour les GNP sont 10 a 100 fois superieures aux GD. Les parametres thermodynamiques obtenus montrent une contribution entropique favorable pour les GNP comparee a une contribution entropique defavorable pour les GD lors de la formation du complexe lectine-carbohydrate. Les resultats cinetiques montrent que la formation du complexe lectine-GNP est une reaction biomoleculaire du deuxieme ordre ayant une vitesse d'association inferieure aux vitesses controlees par diffusion.;Cette these va aborder une telle approche pour developper un biocapteur. Pour amplifier et optimiser les interactions proteines-carbohydrates cette etude combine l'efficacite des glycodendrimeres (GD) pour la reconnaissance de lectines et les proprietes optiques de l'or afin de developper des glyconanoparticules d'or (GNP) comme biocapteurs.;Le potentiel de nanoparticules de silice recouvertes de carbohydrates pour la detection des lectines a aussi ete montre dans cette these. Cependant ces dernieres sont moins selectives envers les lectines.