To Explore The Effect Of An Nao Ping Chong Fang On The Inflammatory Response After Cerebral Hemorrhage From The P2X7R/NLRP3 Pathway

O b j e c t i v e : T o e x p l o r e t h e e f f e c t o f A n n a o p i n g c h o n g D e c o c t i o n o n t h e e x p r e s s i o n o f P 2 X 7 R,N L R P 3,c a s p a s e-1 p r o t e i n i n b r a i n t i s s u e a n d t h e c o n t e n t o f I L-1? and IL-1 8 i n s e r u m a f t e r i n t r a c e r e b r a l h e m o r r h a g e,a n d t o c l a r i f y t h e p o s s i b l e m e c h a n i s m o f A n n a o p i n g-c h o n g d e c o c t i o n i n i n h i b i t i n g i n f l a m m a t o r y r e a c t i o n a f t e r i n t r a-c e r e b r a l h e m o r r h a g e,s o a s t o p r o v i d e s c i e n t i f i c b a s i s f o r c l i n i c a l m e d i c a t i o n.M e t h o d s : 1 9 2 S D r a t s w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o s h a m o p e r a t i o n g r o u p(g r o u p A)a n d m o d e l g r o u p.A f t e r s u c c e s s f u l m o d e l i n g,t h e m o d e l g r o u p w a s r a n d o m l y d i v i d e d i n t o m o d e l g r o u p(g r o u p B),l o w d o s e g r o u p(g r o u p C),h i g h d o s e g r o u p(g r o u p D),s o d i u m a e s c i n g r o u p(g r o u p E)a n d B B G g r o u p(g r o u p F).T h e r e w e r e 8 r a t s i n e a c h g r o u p a t 6 h,2 4 h,3 d a n d 7 d 4 time points.In the model group,80?L a u t o l o g o u s b l o o d w a s i n j e c t e d i n t o t h e l e f t c a u d a t e n u c l e u s t o e s t a b l i s h t h e r a t m o d e l o f i n t r a c e r e b r a l h e m o r r h a g e.A t e a c h t i m e p o i n t,t h e r a t s i n e a c h g r o u p w e r e t r e a t e d w i t h d r u g s f o r t h e f i r s t t i m e a f t e r s u c c e s s f u l a w a k e n i n g,a n d t h e n g i v e n d r u g s e v e r y 1 2 h o u r s(B B G g r o u p w a s g i v e n e v e r y 2 4 h o u r s).T h e r a t s i n t h e s h a m o p e r a t i o n g r o u p a n d m o d e l g r o u p w e r e g i v e n g a s t r i c p e r f u s i o n w i t h d i s t i l l e d w a t e r.A t t h e c o r r e s p o n d i n g t i m e p o i n t,t h e r a t s i n e a c h g r o u p w e r e e v a l u a t e d w i t h modified Neurological Severity Scores,t h e p a t h o l o g i c a l c h a n g e s o f b r a i n t i s s u e w e r e o b s e r v e d b y H E s t a i n i n g,t h e c o n t e n t s o f I L-1? and IL-1 8 i n s e r u m w e r e d e t e c t e d b y E L I S A m e t h o d,a n d t h e e x p r e s s i o n o f P 2 X 7 R,N L R P 3 a n d c a s p a s e-1 p r o t e i n i n b r a i n t i s s u e a r o u n d h e m a t o m a w a s o b s e r v e d b y I H C f o r 2 4 h o u r s.R e s u l t s : 1.modified Neurological Severity Scores : t h e n e u r o l o g i c a l d e f i c i t s c o r e o f r a t s i n t h e m o d e l g r o u p a n d e a c h d r u g g r o u p a t e a c h t i m e p o i n t(6 h,2 4 h,3 d,7 d)w a s h i g h e r t h a n t h a t i n t h e s h a m o p e r a t i o n g r o u p(P < 0.0 1),a n d t h e d i f f e r e n c e w a s s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t.T h e n e u r o l o g i c a l d e f i c i t s c o r e i n t h e m o d e l g r o u p w a s t h e h i g h e s t a t 2 4 h o u r s,t h e n d e c r e a s e d g r a d u a l l y,a n d t h e r e w a s n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e b e t w e e n e a c h d r u g g r o u p a n d t h e m o d e l g r o u p a t 6 h o u r s,b u t t h e n e u r o l o g i c a l d e f i c i t s c o r e s i n t h e h i g h d o s e A n n a o p i n g c h o n g D e c o c t i o n g r o u p a n d B B G g r o u p w e r e l o w e r t h a n t h o s e i n t h e m o d e l g r o u p,a n d t h e d i f f e r e n c e w a s s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t(P < 0.0 5).T h e s c o r e o f n e u r o l o g i c a l d e f i c i t i n e a c h d r u g g r o u p w a s l o w e r t h a n t h a t i n t h e m o d e l g r o u p a t 3 d a y s a n d 7 d a y s,b u t s t i l l h i g h e r t h a n t h a t i n t h e s h a m o p e r a t i o n g r o u p,a n d t h e d i f f e r e n c e w a s s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t(P < 0.0 5 o r P < 0.0 1).2.H E s t a i n i n g : a t e a c h t i m e p o i n t i n t h e s h a m o p e r a t i o n g r o u p,t h e b r a i n t i s s u e w a s n o r m a l,t h e c e l l s w e r e a r r a n g e d n e a t l y,t h e c y t o p l a s m w a s a b u n d a n t,t h e n u c l e u s w a s l i g h t l y s t a i n e d a n d t h e n u c l e o l u s w a s c l e a r,w h i l e i n t h e m o d e l g r o u p,n e r v e f i b e r d e g e n e r a t i o n,v a c u o l e-l i k e c h a n g e s,s w e l l i n g a n d d e f o r m a t i o n,t i s s u e i n t e r s t i t i a l e d e m a w e r e o b s e r v e d,e s p e c i a l l y i n 3 d a y s,g l i a l c e l l s p r o l i f e r a t e d,n e u r o n a l n u c l e o l u s s h r a n k,d e g e n e r a t e d a n d n e c r o s e d,a n d t h e n u m b e r d e c r e a s e d.T h e r e w a s n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e b e t-w e e n e a c h d r u g g r o u p a n d t h e m o d e l g r o u p a t 6 h.C o m p a r e d w i t h t h e m o d e l g r o u p a t 2 4 h,3 d a n d 7 d,t h e e d e m a o f c e l l s w a s a l l e v i a t e d,t h e g l i a l c e l l s d e c r e a s e d,a n d t h e d e g e n e r a t i o n a n d n e c r o s i s o f n e u r o n s r e c o v e r e d.T h e e f f e c t o f h i g h-d o s e A n n o p i n g c h o n g d e c o c t i o n g r o u p w a s b e t t e r t h a n t h a t o f l o w-d o s e A n n o p i n g c h o n g d e c o c t i o n g r o u p a n d a e s c i n s o d i u m g r o u p,a n d t h e e f f e c t w a s b e t t e r w i t h t h e p r o l o n g a t i o n o f t r e a t m e n t t i m e.3.T h e c o n t e n t o f I L-1 8 a n d I L-1? in serum of rats in each group at e a c h t i m e p o i n t : t h e c o n t e n t o f s e r u m I L-1 ? in model group and d r u g g r o u p a t e a c h t i m e p o i n t(6 h,2 4 h,3 d,7 d)w a s h i g h e r t h a n t h a t i n s h a m o p e r a t i o n g r o u p(P < 0.0 l),a n d t h e d i f f e r e n c e h a d s t a t i s t i c a l s i g n i f i c a n c e.T h e r e w a s n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e b e t w e e n t h e d r u g g r o u p a n d t h e m o d e l g r o u p a t 6 h,b u t t h e c o n t e n t o f s e r u m I L-1? in t h e h i g h d o s e g r o u p,s o d i u m a e s c i n g r o u p a n d B B G g r o u p a t 2 4 h w a s s i g n i f i c a n t l y l o w e r t h a n t h a t i n t h e m o d e l g r o u p(P < 0.0 5).T h e c o n t e n t o f s e r u m I L-1? in each drug group was significantly lower t h a n t h a t i n t h e m o d e l g r o u p a t 3 d a n d 7 d,a n d t h e c o n t e n t o f s e r u m I L-1? in the high dose Annaopingchong Decoction group was s i g n i f i c a n t l y l o w e r t h a n t h a t i n t h e a e s c i n s o d i u m g r o u p o n 3 d a n d 7 d.T h e c o n t e n t o f s e r u m I L-1 8 i n t h e m o d e l g r o u p a n d e a c h d r u g g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t i n t h e s h a m o p e r a t i o n g r o u p a t e a c h t i m e p o i n t(6 h,2 4 h,3 d,7 d).T h e r e w a s n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e b e t w e e n t h e d r u g g r o u p a n d t h e m o d e l g r o u p a t 6 h,b u t t h e c o n t e n t o f s e r u m I L-1 8 i n t h e h i g h d o s e g r o u p,s o d i u m a e s c i n g r o u p a n d B B G g r o u p a t 2 4 h w a s s i g n i f i c a n t l y l o w e r t h a n t h a t i n t h e m o d e l g r o u p(P < 0.0 5 o r P < 0.0 1).T h e c o n t e n t o f s e r u m I L-1 8 i n e a c h d r u g g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y l o w e r t h a n t h a t i n t h e m o d e l g r o u p a t 3 d a n d 7 d,a n d t h e c o n t e n t o f s e r u m I L-1 8 i n t h e h i g h-d o s e A n n a o p i n g c h o n g D e c o c t i o n g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y l o w e r t h a n t h a t i n t h e s o d i u m a e s c i n g r o u p o n t h e 3 d a n d 7 d,a n d t h e s e r u m I L-1 8 c o n t e n t i n t h e h i g h-d o s e A n n a o p i n g c h o n g D e c o c t i o n g r o u p w a s l o w e r t h a n t h a t i n t h e B B G g r o u p o n t h e 7 d.4.T h e e x p r e s s i o n o f P 2 X 7 R,N L R P 3 a n d c a s p a s e-1 i n t h e b r a i n t i s s u e a r o u n d h e m a t o m a i n 2 4 h o u r s : T h e r e w a s a s m a l l a m o u n t o f e x p r e s s i o n o f P 2 X 7 R,N L R P 3 a n d c a s p a s e-1 i n t h e s h a m o p e r a t i o n g r o u p,a n d t h e a v e r a g e o p t i c a l d e n s i t y o f P 2 X 7 R,N L R P 3 a n d c a s p a s e-1 i n c r e a s e d i n t h e m o d e l g r o u p a n d e a c h d r u g g r o u p,a n d t h e d i f f e r e n c e w a s s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t(P < 0.0 5 o r P < 0.0 1).T h e a v e r a g e o p t i c a l d e n s i t y o f P 2 X 7 R,N L R P 3 a n d c a s p a s e-1 i n e a c h d r u g g r o u p w a s l o w e r t h a n t h a t i n t h e m o d e l g r o u p,a n d t h e a v e r a g e o p t i c a l d e n s i t y o f P 2 X 7 R,N L R P 3 a n d c a s p a s e-1 i n t h e h i g h d o s e A n n a o p i n g c h o n g g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y l o w e r t h a n t h a t i n t h e m o d e l g r o u p,w h i c h w a s t h e s a m e a s t h a t o f B B G,a s p e c i f i c i n h i b i t o r o f P 2 X 7 R.C o n c l u s i o n : 1.Annaopingchong Decocti on can improve the symptoms of neurological impairment in rats with i n t r a cerebral hemorrhage,inhibit the inflammatory response after cerebra l hemorrhage,and protect the neurological function.2.A n n a o p i n g c h o n g d e c o c t i o n may inhibit NLRP3 inflammasosome-synthesis,reduce the content of serum inflammatory factors IL-1 and IL-18 by down-regulating P2X7 R expression,and inhibit the inflammatory response after cerebral hemorrhage.