| La participation des proteases a la regeneration du cartilage est un processus connu, mais le desequilibre entre ces proteases et leurs inhibiteurs, en faveur des premier, peut amener une condition pathologique. Cette etude consiste a localiser dans la sequence peptidique de la calpastatine les peptides responsables de sa reconnaissance par les serums de patients atteints par la polyarthrite rhumatoide (PR) et le lupus erythemateux dissemine (LED). Les serums de 100 patients ont te testes sur les divers domaines de la calpastatine afin de parvenir a localises le domaine immunodominant. Les serums de 82,5% (33/40) des patients rhumatoides ont detecte la calpastatine. 12,5% des serums sont positifs uniquement pour le domaine 4, alors que 22,5% le sont pour le domaine 2 et 47,5% pour les deux domaines conjointement. Chez les lupiques, le nombre total de serums positifs pour la calpastatine est de 34,5% (10/29), dont un reagit uniquement avec le domaine 4, 5 serums reagissent avec le domaine 2 et 4 autres avec les deux domaines. Seulement 3 des 31 serums normaux ont reagi avec la calpastatine, dont un avec le domaine L, deux avec le domaine 4, et aucun avec le domaine 2. Pour determiner le ou les epitopes responsables de la reactivite des auto-anticorps avec Ia calpastatine, nous aeons synthetise des peptides dens les domaines 2 et 4. Parmis les serums PR testes, 16 des 23 serums (69,5%) D4 positifs ont reagi avec deux epitopes C-terminaux en position 673--684 et 697--708. Seulement 6 des 25 serums D2 positifs ont reagi avec divers peptides. Nous aeons aussi teste l'activite catalytique de la calpaine de type II et l'activite inhibitrice de nos proteines recombinantes correspondantes a chacun des domaines de la calpastatine. Nous aeons ainsi determine la hierarchie suivante: RA1 >>> D1 > DL2 > D3 > D4 > D2, RA1 etant le plus inhibiteur et D2 le moins inhibiteur. En plus, des essais preliminaires suggerent que Ies IgGs purifies de serums PR positifs aux domaines 2 et 4 interferent dens l'inhibition de la calpaine par la calpastatine. Cela suggere l'implication des anticorps anticalpastatine dens la pathologie de la polyarthrite rhumatoide.;Suite au criblage de la librairie d'expression de placenta humain dens le vecteur lambdagt11 avec une sonde ADNc de calpastatine correspondent aux domaines 3 et 4, nous aeons identifie deux nouvelles regions 3' non-codantes differentes. Afin de prouver l'appartenance de ces regions 3' noncodantes au genome et aux messagers de la calpastatine, nous aeons procede a plusieurs analyses moleculaires. Ainsi, nous aeons hybride des membranes contenant les ARN poly A de 16 tissus humains avec une sonde representant la region codante, et deux autres dans les regions 3 ' non-codantes. Nos resultats ont demontre que la calpastatine est ubiquitaire et qu'il existe deux ARNm principaux a 4.9 kb et a 3.3 kb. En plus, les regions 3' non-codante de la calpastatine sont differentiellement exprimees duns les tissus testes. Nous avons aussi demontre la presence de ces regions 3' non-codantes par RT-PCR dans les cellules HeLa, les osteoblastes et le placenta humain, avec une predominance de la region 3' non-codantes de type RA 1.6. Cependant les proteines recombinantes exprimees a partir des ADNc de RA1.2 et RA1.6 ne reagissent pas differemment sur le plan immunologique avec les serums des patients. |
