| Objectiv e: To observe the effects of Shenqi Bufei Decoction on the expression of m i R-1 4 6,N r f 2 a n d N F-κB in the rat models of COPD and the human airway epithelial c e l l s()a f t e r s mo k e t r e a t me n t.A f t e r t r e a t me n t w i t h s i R N A,mi R N A 1 4 6 w a s u s e d to d e t e c t t h e e ff e c t o f S h e n q i B u f e i D e c o c t i o n s e r u m o n N r f 2 a n d N F-κB in airway e p i t h e l i a l c e l l s,a n d e l u c i d a t e t h e a n t i-i n f l a m ma t o r y me c h a n i s m o f S h e n q i B u f e i D e c o c t i o n i n t h e t r e a t m e n t o f C O P D.Method: 1.A n i ma l e x p e r i me n t : 4 0 h e a l t h y c l e a n l i n e s s l e ve l Wi s t a r r a t s w e r e d i v i d e d i n t o 4 g r o u p s r a n d o ml y,1 0 i n e a c h g r o up,w h i c h we r e n o r ma l c o n t r o l g r o u p,mo d e l g r o u p,Fl u i mu c i l g r o u p a n d C h i n e s e me d i c i n e g r o u p.T h e n o r ma l c o n t r o l g r o u p w a s n o t t r e a t e d,a n d t h e o t h e r 3 g r o u p s w e r e g i ve n s mo k e a n d LP S i n t o a i r w a y t o b u i l d mo d e l s.T h e n o r ma l c o n t r o l g r o u p a n d mo d e l g r o u p w e r e g i ve n i n t r a g a s t r i c a d m i n i s t r a t i o n w i t h n o r ma l s a l i n e,a n d t h e Fl u i mu c i l g r o u p a n d C h i n e s e me d i c i n e g r o u p w e r e g i ve n Fl u i mu c i l a n d S h e n q i B u f e i D e c o c t i o n.T h e i n t r a g a s t r i c a d mi n i s t r a t i o n t o t a l l y l a s t s f o r 3 0 d a ys.O b s e r ve t h e g e n e r a l s t a t e,l u n g f u n c t i o n a n d p a t h o l o g i c a l c h a ng e s o f l u n g t i s s u e i n e a c h g r o u p w i t h t r e a t me n t,t h e n d e t e c t t h e c l a s s i f i c a t i o n a n d c o u n t o f i n f l a m ma t o r y c e l l s i n r a t a l ve o l a r l a v a g e f l u i d,a n d t h e m R N A o f mi R-1 4 6 a,N F-κB and Nrf2 and the p r o t e i n e x p r e s s i o n o f N F-κB,Nrf2 in lung tissue.2.C e l l e x p e r i me n t : A c c o r d i n g t o t h e e x p e r i m e n t g u i d a n c e o f t h e s a me p e r i o d,d e t e c t t h e m R N A a n d p r o t e i n e x p r e s s i o n o f mi R-1 4 6 a,N F-κB,Nrf2 in t h e a i r w a y e p i t h e l i a l c e l l s t r e a t e d w i t h 1 0 % s mo g s o l u t i o n.T h e a ir w a y e p i t h e l i a l c e l l s t r e a t e d b y s i R N A t e c h n i q u e w o u l d b e d e te c t e d t h e e x p r e s s i o n o f N r f 2 a n d N F-κB m RNA at hour 0,3,6,1 2 a n d 2 4;T h e e p i t h e l i a l c e l l s u s e d i n t h e p r e v i o u s p a r t w e r e f u r t h e r c u l t u r e e d w i t h t h e S h e n q i B u f e i D e c o c t i on s e r u m,b l a n k s e r u m,mi R-1 4 6 a i n h i b i t o r a n d a n a l o g s.T h e c o n t e n t o f mi R-1 4 6 a a n d t h e e x p r e s s i o n o f m R N A a n d p r o t e i n o f N F-κB and Nrf2 in e a c h g r o u p w e r e d e t e c te d b y R e a l t i me-P C R a nd We s t e r n b l o t a t h o u r 0,3,6,1 2 a n d 2 4.Result: 1.C o mp a r i s o n o f l u n g f u n c t i o n b e t w e e n t h e mo d e l g r o u p a n d n o r m a l c o n t r o l g r o u p : FE V0.3/ FV C,FE V0.3 a n d P E F w e r e s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d(P < 0.0 5).C o mp a r e d w i t ht h e mo d e l g r o u p,t h e Fl u i mu c i l g r o u p a n d th e S h e n q i B u f e i D e c oc t i o n g r o u p h a d s i g n i f i c a n t i mp r o ve me n t i n l u n g f u n c t i o n(P < 0.0 5).2.P a t h o l o g i c a l s p e c i m e n s s h o w e d t h a t S h e n q i B u f e i D e c o c t i o n a n d Fl u i mu c i l c o u l d a l l e v i a t e t h e i n f i l t r a t i o n o f i n f l a m ma t o r y c e l l s i n t h e l u n g t i s s u e o f C O P D r a t s,r e d u c e t h e f o r ma t i o n o f p u l mo n a r y b u l l a e,a n d i mp r o v e t h e d e g r e e o f e mp h ys e ma i n C O P D r a t s.T h e r e w a s n o d i ff e r e n c e b e t w e e n t h e C h i n e se me d i c i n e g r o u p a n d Fl u i mu c i l g r o u p c o mp a r e d w i t h t h e mo d e l g r o u p(P > 0.05).3.T h e i n f l a m ma t o r y c e l l s i n t h e a l ve o l a r l a va g e f l u i d o f e a c h g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d a f t e r b e i n g t r e a t e d b y s mo k e a n d LP S,w h i c h w a s s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t o f t h e n o r ma l c o n t r o l g r o u p(P < 0.0 5).S h en q i B u f e i D e c o c t i o n g r o u p a n d Fl u i mu c i l g r o u p c o u l d s i g n i f i c a n t l y r e d u c e t h e c o u n t o f B A L F n e u t r o p h i l s,ma c r o p h a g e s a n d l ymp h o c yt e s,w h i c h w a s s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t c o mp a r e d w i t h t h e mo d e l g r o u p(P < 0.0 5).T h e r e w a s n o s i g n i f i c a n t d i ff e r e n c e b e t w e e n t h o s e t w o g r o u p s.(P > 0.0 5).4.T h e ex p r e s s i o n l e ve l s o f mi R-1 4 6 a,N F-κB and Nrf2 in the lungs of rats were s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t i n t h e n o r ma l c o n t r o l g r o u p(P < 0.0 5).A f t e r t r e a t me n t,c o mp a r e d w i t h t h e mo d e l g r o u p,S h en q i B u fe i D e c o c t i o n g r o u p a nd Fl u i mu c i l g r o u p c o u l d s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e t h e e x p r e s s i o n o f m i R-1 4 6 a a n d N r f 2 i n t h e l u n g s o f r a t s,a n d d e c r e a s e t h e e x p r es s i o n o f N F-κB(P < 0.05).T h e r e w a s no s i g n i f i c a n t d i ff e r e n c e b e t w e e n t h o s e t w o g r o u p s(P > 0.0 5).5.1 0 % s mo g s o l u t i o n c a n i n d u c e h i g h m R N A ex p r e s s i o n o f mi R-1 4 6 a,N F-κB and Nrf2 i n h u ma n a i r w a y e p i t h e l i a l c e l l s,a n d t h e e x p r e s s i o n a t h o u r 2 4 i s s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t a t h o u r 0(P < 0.0 5).T h e e x p r e s s i o n o f e a c h f a c t o r i n c r e a s e d w i t h t i me,t h e n m i R-1 4 6 a a n d N r f 2 i n c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y a t 6 h,h i g h e r t h a n 0 h(P < 0.0 5),w h i l e N F-κB i n c r e a s e d a t 3 h,h i g h er t h a n 0 h(P < 0.0 5).N r f 2 a n d N F-κB protein expression was c o n s i s t e n t w i t h m R N A.6.A f t e r s i R N A i n h i b i t e d m i R-1 4 6 a,t h e s mo g s o l u t i o n i n d u c e d t h e h i g h e x p r e s s i o n o f N r f 2 a n d N F-κB in the cells.After 3h,the expression of Nrf2 and NF-κB m RNA in the s i R N A g r o up w a s h i g h e r t h a n 0 h(P < 0.0 5).A t 24 h,t h e e x p r e s s i o n o f N F-κB m RNA was s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P < 0.05)a n d t h e ex p re s s i o n o f N r f 2 w a s d ec r e a s e d(P < 0.0 5)c o mp a r e d w i t h t h e mo d e l g r o u p.T h i s i n d i c a t e d t h a t t h e e x p r e s s i o n o f N F-κB wasn e g a t i ve l y c o r r e l a t e d w i t h t h e l e ve l o f mi R-1 4 6 a a f t e r b e i n g t r e a t e d w i t h t h e i n h i b i t i o n o f m i R-1 4 6 a,w h i l e N r f 2 w a s p o s i t i ve l y c o r r e l a t e d,a n d t h e e x p r e s s i o n o f N r f 2 b e g i n e d t o a p p e a r i n t h e e a r l y s t a g e o f i n f l a m ma t i o n.7.C h i n e s e me d i c i n e(S h e n q i B u f e i D e c o c t i o n)s e r u m c o u l d i n c r e a s e t h e e x p r e s s i o n o f m i R-1 4 6 a,N r f 2 a n d d e c r e a s e t h e e x p r e s s i o n o f N F-κB in the airway epithelial cells t r e a t e d w i t h 1 0 % s mo g s o l u t i o n.A t h o u r 3,c o mp a r e d w i t h h o u r 0,N r f 2 i n c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y(P < 0.0 5)w i t h t i me,w h i c h s h o w e d a n i n c r e a s i n g t r e n d a t 6 h,1 2 h,2 4h,a l s o h i g h e r t h a n 0 h(P < 0.0 5).A f t e r 2 4 h o u r s o f c u l t u r e,t h e e x p r e s s i o n o f mi R-1 4 6 a a n d N r f 2 i n c r e a s e d i n e a c h g r o u p,a n d t h e e x p r e ss i o n i n c r e a s e d i n t h e C h i n e s e me d i c i n e s e r u m,w h i c h w a s h i g h e r t h a n t h e o t h e r t w o g r o u p s(P < 0.0 5).T h e e x p re s s i o n o f N F-κB i n c r e a s e d i n t h e C h i n e s e me d i c i n e s e r u m o f a t t h e 3 r d,6 t h,1 2 t h a n d 2 4 t h h o u r,w h i c h w a s h i g h e r t h a n 0 h(P < 0.0 5).A t t h e 24 t h ho u r,t h e e x p r e s s i o n l e ve l o f N F-κB in C h i n e s e me d i c i n e s e r u m w a s l o w e r t h a n t h o s e i n t h e s mo g s o l u t i o n a n d b l a n k s e r u m g r o u p(P < 0.0 5).N r f 2 an d N F-κB protein expression w a s c o n s i s t e n t w i t h m R N A.8.A f t e r s i R N A i n h i b i t e d t h e e x p r e s s i o n o f mi R-1 4 6 a,t h e l e ve l m R N A a n d p r o t e i n o f N r f 2 a n d N F-κB increased in the smoke + si RNA group,smoke + si RNA + blank serum g r o u p a n d s mo k e + s i R N A + C h i n e s e me d i c i n e s e r u m g r o u p w i t h t h e i n c r e a s e o f c u l t u r e t i me.A t t h e 3 r d h o u r,t h e e x p r e s s i o n o f N r f 2 i n t h e C h i n e s e me d i c i n e g r o u p w a s h i g h e r t h a n t h a t a t 0 h(P < 0.0 5),i n d i c a t e d t h a t C h i n e s e me d i c i n e c o u l d p r o mo t e t h e e x p r e s s i o n o f N r f 2 a nd p a r t i c i p a t e i n i n f l a m ma t i o n p r o t e c t i o n a t a n e a r l y s t a g e.A t 3 h,6 h,12 h a nd 2 4 h,c o mp a r e d w i t h t h e s mo k e + s i R N A g r o u p an d s mo k e + s i R N A + b la n k s e r u m g r o u p,t h e N r f 2 o f C h i n e s e me d i c i n e s e r u m g r o u p w a s l o w e r t h a n b o t h g r o u p s,a n d N F-κB was h i g h e r t h a n b o t h g r o up s(P < 0.0 5).It i n d i c a t e d t h a t C h i n e s e me d i c i n e c a n p a r t i a l l y i n h i b i t s i R N A an d mi R-1 4 6 a a n d r e g u l a t e t h e ex p r e s s i o n o f N r f 2 a n d N F-κB.Conclusion: 1.S h e nq i B u f e i D e c oc t i o n c o u l d r e d u ce t h e l eve l o f i n f l a m ma t i o n i n t h e l u n g s o f t he r a t s w i t h C O P D,i mp r o ve l u n g f u n c t i o n a n d d e l a y t h e p a t h o l o g i c a l p r o c e s s o f l u n g t i s s u e i n C O P D r a t s.2.S h e n q i B u f e i D e c o c t i o n c o u l d i n c r e a s e t h e e x p r e s s i o n o f m i R-1 4 6 a a n d N r f 2 i n l u n g t i s s u e o f t h e r a t s w i t h C O P D,an d r e d u c e N F-κB,which had anti-i n f l a m ma t o r y e ff e c t.3.mi R-1 4 6 w a s i n vo l ve d i n t h e e x p r e s s i o n o f N r f 2 i n t h e p a t h o g e n e s i s o f C O P D i n d u c e d b y s mo g s o l u t i o n,s h o w i n g a p o s i t i ve c o r r e l a t i o n.4.mi R-1 4 6 w a s i n vo l v e d i n t h e e x p r e s s i o n o f N F-κB in the pathogenesis of COPD i n d u c e d b y s mo g s o l u t i o n,s h o w i n g a n e g a t i ve c o r r e l a t i o n.5.S h e n q i B u f e i D e c o c ti o n p o s i t i ve l y r e g u l a t e d N r f 2 a n d n e g a t i ve l y r e g u l a t e d N F-κB e x p r e s s i o n i n t h e p a t h og e n e s i s o f C O P D i n d u ce d b y s mo g s o l u t i o n t h r o u g h i n h i b i t i n g m i R N A-1 4 6 a. |
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